菌種保藏方法及注意事項

農產品貯藏時一般都采用低溫貯藏法和化學藥劑處理法，但是很多熱帶、亞熱帶水果，如香蕉、芒果、荔枝等在低溫下容易出現冷害，不能采用低溫貯藏法進行保存，并且低溫貯藏成本高、耗能大、質量不穩定；化學藥劑處理能夠很好的實現果蔬采摘后的保鮮，但是化學試劑的殘留以及有毒殺菌劑的使用，給人們帶來的食品安全隱患問題，令人望而生畏。近10年來，生物保鮮成為國內外科研工作者研究的重點，利用微生物拮抗菌進行保鮮的產品已經陸續上市：Blossom-Protec；CandiFruit；Shemer；Bio-Save；MUSCODORTM等，影響微生物保鮮菌商業化生產的因素之一是：實際生產使用中，菌種的退化、在貯藏及惡劣環境中抗病能力下降。本文詳細綜述了微生物菌種的保藏方法，降低保鮮拮抗菌在生產、保藏過程中的變異及退化。液氮罐廠家

1傳代保藏

傳代保藏菌種是微生物保存中最常用的方法之一。很多微生物在低溫或者干燥處理時，會很快死亡，為了保存菌種的活性，就要定期不斷的進行菌種轉接、培養后再保存。我們所喝的酸奶就是采用這種方式進行生產菌種保存的。這種會產生酸性物質的菌種，在進行傳代培養時要在培養基中添加少量的碳酸鈣。傳代培養的過程中，培養的養分不要太豐富，培養溫度也要比孢子最適合的生長溫度略低。傳代培養保存微生物的方法簡單易行，只要培養皿就能實現，不需要特殊的設備，是目前實驗室各類微生物保藏最常用的方法。但是此法也存在著一些缺點，如培養基容易干枯；菌種管處經常被其他雜菌污染發生霉變；菌種在反復傳代的過程中發生基因突變，不能保證優良性狀傳遞下來；在傳代的過程中產生的孢子活性越來越弱。

2液體石蠟覆蓋保藏

為了傳代保存時，減少雜菌的侵染，使用液體石蠟進行覆蓋加以輔助，就是在斜面培養基上，當在最適合的培養條件下培養出健壯的菌體后，加入已滅菌的液體石蠟油，并將此斜面培養基保藏在低溫條件下。由于培養物表面覆蓋液體石蠟后可隔絕空氣，因此降低了微生物菌體的物質代謝，延緩細胞的衰老，同時也防止培養基水分蒸發，是一種簡易的菌種保藏方法。很多產生孢子能力低的絲狀菌都是采用這種方法進行保存。這種方法制作方法簡單，不需要經常移種傳代。對大多數種類的菌種保藏效果都比較理想。霉菌、放線菌、芽孢細菌可保藏2年以上，沒有芽孢的細菌都可以采用這種方法保藏1年左右，一些很難保藏的菌種如腦膜炎球菌，可以的采用這種方法保存至少3個月以上。但是采用石蠟覆蓋保藏法的菌種攜帶不方便，保存時需要大量空間，以保證培養基能直立放置。在取培養物進行移種時，一般要通過火焰灼燒將石蠟融化，這個過程可能造成培養物與石蠟油飛濺，有安全隱患。

3冷凍干燥保藏

冷凍干燥保藏法為菌種保藏方法中最有效的方法之一，對一般生活力強的微生物及其孢子以及無芽胞菌都適用。這種方法適用于菌種長期保存，一般可保存數年至十余年。因為冷凍干燥法使菌種處于一個無氧的真空環境中，微生物不能進行正常的新陳代謝，只能處于休眠狀態。當環境變為適合生長的適合，才會繼續增殖生長。所以保藏期就比較長。目前像春雷霉素、頭孢霉素、卡那霉素等抗生素菌種不易產生孢子的絲狀真菌，都是采用冷凍干燥法保存的。另外我國大多數生物制品菌種都是采用該法保藏。液氮罐廠家

4液氮超低溫保藏

液氮超低溫保藏法是菌種長期保藏的最有效最可靠的方法。液超低溫保藏法是把菌種裝在含有冷凍保護劑的安瓶瓶內，將該安瓶瓶放人液氮（-196℃）中保藏。由于菌絲體處于-196℃，其代謝降低到完全停止的狀態。甘油、血清蛋白、二甲基亞砜、聚乙烯氮戊環、糊精、吐溫80等可用做液氮低溫保藏法的保護劑，其中甘油在進入和游出細胞時速度非常緩慢，造成強烈的脫水，從而保護細胞，是目前最常用的保護劑。不同微生物要選擇不同的保護劑，再通過實驗加以確定保護劑的濃度，原則上是控制在不足以造成微生物致死的濃度，一般甘油為10％-20％、二甲基亞砜為5％-10％、聚乙烯氮戊環為0.4mmol/L。

5蒸餾水保藏

蒸餾水保藏菌種的方法普遍的應用于醫學微生物、食品微生物和工業微生物中，如皮膚癬菌、酵母、霉菌、放線菌的保藏，在食用菌金針菇的保藏中也有提到。其方法是：將菌體懸浮于蒸餾水中，即可在室溫下保存數年，此法應注意避免水分的蒸發。

6結論

綜上所述，傳代保藏法、液體石蠟覆蓋保藏、冷凍干燥保藏、液氮超低溫保藏、蒸餾水保藏等菌種保藏方法都各有各的優點，針對不同的拮抗菌的特點及保藏目的需要，選擇最好的保藏方法。目前，拮抗菌的保藏的最大問題是：如何保證在生產過程中菌種的穩定性，避免生產多代產品后菌種的退化及衰老，尤其是工業化生產的生物保鮮產品在貨架期間的貯藏。因此，利用拮抗菌保鮮的工廠化產品的貯藏，將是生物保鮮菌保藏研究的一個重要的部分。